Cours 3

je ne comprends pa tres bien les Ac recombinants (dia 54-55-56)... si on part pa d'une immunisation animale, on part de quoi??? pcq ds la dia 55, on montre kon part du prélèvement d'ADN au niveau des cellules B mais elles viennent d'ou ces cellules B?? pcq ds le schéma ils mettent que ces cellules B viennent d'une souris immune ou d'une large population de donneurs non immun??? pa compris :-)...
et puis une fois kil y a eu multiplication des phages ds la bactérie, que se passe t il???
jesp k c comprehensible c k g ecrit :-)...merci...

je ne pense pas qu'elle nous embête avec la technique de fabrication, mais bon...
Je viens de regarder, effectivement c'est pas très clair.

En gros, tu isoles des lymphocytes B à partir d'un grand nombre d'humains. Et je suppose (c'est là que c'est pas clair), que parmi tous cette bibliothèque de lymphocytes, tu en auras quelques uns qui vont t'intéresser au niveau de la reconnaissance antigénique qui t'intéresse.

je comprends le shéma comme ça :

-Tu isoles l'ADN, tu amplifies par PCR (là tu amplifies tous les fragments Ig : t'es pas spécifique de l'Ig que tu cherches)

-tu l'insères dans un vecteur : un phage. Ce phage exprimera l'immunoglobuline à sa surface. Donc tu infectes des bactéries qui vont produire plein de phages avec des Ig exprimées à leur surface.

-Tu récoltes tous ces différents phages exprimant des Ig différentes (là on passe au 2ème schéma)

- il expose les phages à une mixture contenant l'antigène qui t'intéresse, il lave, recueille les phages qui sont restés, ré-infecte des E.coli --> t'auras une population enrichie en phages qui expriment une Ig qui peut se lier à l'antigène.

- tu peux faire plusieurs cycles de sélection pour améliorer ta spécificité (un peu comme dans un centre germinatif )

- tu arrives finalement avec des phages ayant une bonne spécificité pour l'antigène, tu fais pousser les bactéries, puis tu dilues pour obtenir des colonies de clones (je suppose qu'il y a un mécanisme de sélection), et tu as donc tes phages qui expriment l'Ig qui t'intéresse.

A partir de là, je suppose qu'il y a moyen de cliver le phage pour isoler l'immunoglobuline

Je ne sais pas si c'est clair, et j'ai peut être mal interprété.

merci pr tes reponses....

j'ai pas tout pigé avec la synthèse de novo et la sauvage pour les nucléotides dans la production des anticorps monoclonaux...

Le milieu HAT inhibe la voie de novo (grâce à l'aminoptérine), mais la voie sauvage est toujours active ? --> comment ça se fait que les cellules meurent sur le milieu HAT ?